信和生物

自20世纪80年代中期以来，随着越来越多的制药公司寻求更多的药物形式来扩展其管道，治疗性单克隆抗体已成为增长最快的一类治疗药物。此外，随着一些热门单克隆抗体的专利开始到期，生物仿制药现在有更多的机会进入市场。在这种背景下，评估生物疗法的安全性和有效性在药物开发过程中变得势在必行。特别是，进行药代动力学(PK)和抗药物抗体(ADA)分析，以研究和评估新的候选药物和生物仿制药。对于PK/ADA检测，抗独特型抗体(Anti-IDs)是测量患者样本中抗体药物浓度的有力工具，并作为抗药物抗体(ADA)的阳性对照。

药代动力学(PK)分析中的抗id

药代动力学(PK)描述和描述了药物在人或动物体内的四个不同阶段:吸收、分布、代谢和排泄(也称为ADME)。在药物开发中，PK试验提供了药物与人体相互作用的基本信息，以及药效的强度和持续时间。为了开发生物类似药，需要比较PK法来评估与参比药物生物活性的潜在差异。

根据结合方式和性质的不同(图1)，抗独特型抗体可分为抗原阻断型、非阻断型和复杂特异性三种类型。基于这些特点，可以建立不同形式的PK试验来测量血清中游离、总或结合的抗体药物浓度。

抗- ids可用于检测和定量动物或人血清中的抗体药物水平，是PK研究的关键检测试剂。抗体药物的定量分析有多种分析方法，其中ELISA是最常用的形式。在抗- id捕获ELISA(图2)中，抗- id被包被到板上，然后含有抗体药物的样品被添加到系统中。然后用标记的抗- id对抗体药物进行定量，这些抗- id与药物的特异性结合。

免疫原性/抗药物抗体(ADA)分析中的抗id

在单克隆抗体、adc和融合蛋白等治疗性蛋白的开发过程中，涉及抗药物抗体(ADA)检测的免疫原性评估是一个关键步骤。在这些情况下，通常采用多层测试方法(图3)。该方法利用一种敏感的筛选试验来识别阳性抗体样本，一种验证性试验来减少假阳性结果，然后是一种表征试验来评估抗体的中和能力。

在整个过程中，抗独特型抗体是不可缺少的试剂。ADAs的检测方法包括ELISA、放射免疫沉淀法(RIPA)、表面等离子体共振法(SPR)和电化学发光法(ECL)。其中，桥接ELISA是最常用的方法，可以检测所有同型ADAs (IgG, IgM, IgA等)。在典型的桥接ELISA中，将抗体药物预包被在板上，标记后的抗体药物与患者样本孵育，以检测ADAs的存在(图4)。Anti-IDs将作为阳性对照或参考标准，用于样本中ADAs的定性分析。

抗独特型抗体生成包

为了加速你的药物研发，中国的生物提供全方位的自定义抗独特型抗体从抗原制备、抗独特型抗体开发到检测方法建立和试剂盒开发的生产服务。我们的团队拥有强大的专业知识和经验，可以针对多种模式，包括全长单抗，F(ab’)₂Fab, scFv, VHH, adc, bsAbs和fc -融合蛋白。定制抗独特型抗体可用于建立药代动力学(PK)/ADA测定，以确定样品中的特异性抗体药物或ADA水平。

案例研究#1:开发针对BsAbs的Anti-IDs

双特异性抗体(BsAbs)是基因工程抗体，具有两个特定的抗原结合位点，识别两个不同的表位或抗原。与单抗类药物相比，BsAb类药物往往具有蛋白水解、聚集、物理不稳定等倾向。另外，两个不同的抗原结合位点与它们对应的配体的结合可能会对彼此产生较大的空间位阻效应。考虑到这些因素，针对不同抗原结合表位的双特异性抗体筛选抗id是非常具有挑战性的。

认识到这些障碍，华生生物已经成功完成了多个识别BsAb药物的抗id开发项目。这些生成的抗id可以分别与两个不同的抗原结合位点结合，并且具有很强的特异性。如图5所示，7个抗独特型小鼠单克隆抗体克隆与BsAb药物具有高度特异性结合，与人IgG同型对照或人总IgG无结合。此外，我们还筛选了一组针对BsAb药物单特异性单位a和B的中和性和非中和性抗id。抗体配对然后进行捕获ELISA格式。在不同浓度的人血清中，检测灵敏度达到pg水平，回收率为80 ~ 120%。相关数据如下图6、图7所示。

案例研究#2:生成针对scFv/VHH的anti - id

单链抗体是免疫球蛋白重链和轻链可变区融合蛋白，由肽连接子连接。VHH是位于重链上的单一变量域，也称为纳米体。scFv和VHH的特点是体积小，特异性强，组织穿透力强，稳定性高。然而，由于其低免疫原性，抗scfv /VHH抗体的开发仍然具有挑战性。

为应对这一技术挑战，信和生物建立了单链抗体/VHH免疫平台。scFv和VHH免疫小鼠的成功率分别达到80%和100%。我们还启动了VHH快速免疫方案，使小鼠免疫可在37天内完成。在图8中，VHH小鼠的滴度足以用于后续的细胞融合，与常规免疫相比，快速免疫显示出相当的滴度水平。

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